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【引用】斐林试剂、班氏试剂和双缩脲试剂比较  

2011-05-08 01:18:55|  分类: 生物必修1分子与 |  标签: |举报 |字号 订阅

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斐林试剂、班氏试剂和双缩脲试剂比较

斐林试剂和班氏试剂都是检验还原性糖的试剂,二者的使用成分原理、及保存方法有区别;还原糖的鉴定于蛋白质的鉴定所使用的斐林试剂和双缩脲试剂成分相同,但二者的使用方法及原理也不尽相同。下面就从这几种试剂的使用原理、成分及使用方法等方面做一简单总结。

1. 斐林试剂和班氏试剂

(1)成分不同:班氏试剂的配置方法: 400mL水中加85g柠檬钠和50g无水碳酸钠;50mL加热的水中加入8.5g无水硫酸铜。制成CuSO4溶液;把CuSO4溶液倒入柠檬酸钠溶液-Na2CO3溶液中,边加边搅,如产生沉淀可滤去。斐林试剂的配置为:斐林试剂甲液为0.1 g/mLNaOH的溶液。乙液为0.05 g/mL CuSO4的溶液。使用时,将4~5滴乙液滴入2 mL甲液中,混合后立即使用

(2)原理不同:柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐,在水中它们均可水解产生OH-,与柠檬酸钠-Na2CO3溶液和CuSO4溶液混合时,Cu2+和OH-结合,生成Cu(OH)2与葡萄糖中的醛基(-CHO)反应生成砖红色沉淀。而斐林试剂则是CuSO4于NaOH发生反应生成Cu(OH)2。当然,无论用班氏试剂还是斐林试剂,归根结底都是Cu(OH)2与醛基(-CHO)在沸水浴加热条件下反应而生成砖红色的Cu2O沉淀,两者反应现象一样,这就是二者的相同之处。

(3)保存方式不同:斐林试剂甲和斐林试剂乙可产生较多地Cu(OH)2,很容易沉淀析出,因此斐林试剂一般为现用现配;而班氏试剂的配方中,柠檬酸钠为-Na2CO3一对缓冲物质,产生的OH-数量有限,与溶液混合后产生的Cu(OH)2浓度相对较低,不易析出,因此该试剂可长期保存。

2. 斐林试剂和双缩脲试剂

(1)浓度不同:斐林试剂甲为0.1 g/mL NaOH溶液,斐林试剂乙液为浓度为0.05 g/mL的CuSO4;双缩脲试剂A为0.1 g/mL NaOH溶液(与斐林试剂甲完全相同),双缩脲试剂B为0.01 g/mL的CuSO4溶液(与斐林试剂乙液浓度不同)

(2)使用原理不同

斐林试剂是新配制的Cu(OH)2溶液,它在加热条件下与醛基反应,被还原成砖红色的Cu2 O沉淀,可用于鉴定可溶性还原糖的存在。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液的颜色变化过程为:浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)。

鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,使用的是双缩脲试剂,发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下Cu2+的与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲(H2NOC-NH-CONHH2)结构相似的肽键,所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生紫色反应,可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。

(3)使用方法不同

斐林试剂使用时,先反NaOH溶液和CuSO4溶液混合(将滴CuSO4溶液滴入(2mL)NaOH溶液中),而后立即使用:双缩脲试剂使用时,先加入NaOH溶液(2mL),振荡摇匀,造成碱性的反应环境,然后再加入3~4滴CuSO4溶液,振荡摇匀后观察现象。如果混合后使用或者次序颠倒,则过多的Cu2+(蓝色)使溶液生成的紫色被掩盖,实验效果不容易观察。

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