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试管中吸水涨破的哺乳动物成熟红细胞膜怎样离心才能与其他物质分开?  

2012-11-24 10:46:02|  分类: 教材研究探讨 |  标签: |举报 |字号 订阅

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试管中吸水涨破的哺乳动物成熟红细胞膜怎样离心才能与其他物质分开?
必修一P41:如果上述实验在试管中进行,细胞破裂后,还需用什么方法才能获得较纯的细胞膜?
试管中吸水涨破的哺乳动物成熟红细胞膜怎样离心才能与其他物质分开? - 蒋迎仙 - 蒋迎仙的生物课堂内外
 

教师用书的提示:

细胞破裂后细胞内物质流出,细胞膜和细胞质中的其他结构质量不一样,可以采用不同转速离心的方法将细胞膜与其他物质分开,得到较纯的细胞膜。

疑问:哺乳动物成熟红细胞比较简单,细胞破裂后,试管液体中由细胞膜、血红蛋白、无机盐、水等成分。离心的原理是根据物质的质量不同,质量大的会沉淀在下面,质量小的在上面。试管中细胞膜的质量明显大于其他物质,所以我觉得不需要采用不同的转速多次离心,只需离心一次就能够将细胞膜和其他物质分开了。然后用分液漏斗将他们分开就得到较纯的细胞膜了。所以我认为教师用书“可以采用不同转速离心的方法”即差速离心没有必要,大家如何看?

红细胞膜怎样离心才能与其他物质分开?

如何制备细胞膜 [精华


附:

细胞膜和细胞器的分离提纯方法

细胞中的膜结构是整个细胞及多种细胞器的界膜,对于保持细胞和细胞器的独立性是必不可少的,同时很多重要的功能是在膜结构上完成的。为了研究细胞膜和细胞器的结构与功能,首先要分离出形态与结构完整的、具有生物活性的、纯度高的样品。在研究工作中,分离细胞膜和细胞器可以用以下方法。

首先是制备一定量的细胞,细胞的来源可以是培养细胞,也可以是某种组织。培养细胞的收集相对简单一些,直接用胰酶将细胞从培养瓶上消化下来,制成细胞悬浮液。比较易碎的组织细胞的收集如肝、脾等,可采用匀浆的方法,稍加研磨就可制成细胞悬液。有些结缔组织,直接研磨不易分离出细胞,可先用适量的胶原酶处理。

细胞制备出来后,进行匀浆处理。匀浆的方法有多种,如用高速打碎机破碎,低渗,玻璃珠与细胞共振荡,冻融法,超声波打碎等。可根据实验需要和实验室条件来选择。无论选择哪种方法,都要尽可能保持膜的完整性。整个操作过程要避免过于激烈,pH、离子强度和渗透压等条件要适中,一般常用中性和等渗溶液。

匀浆产生的细胞裂解物,可通过一系列差速离心再加上一个梯度离心来分离细胞膜与细胞器,梯度是根据细胞器的大小、密度和沉降特性来设计的。匀浆分步分离的第一步是差速离心,在一系列的离心过程中离心力逐渐加大,并且将细胞器加入到具有密度梯度的介质中离心,常用的分离介质有蔗糖、甘油、葡聚糖等。由于每种细胞器的大小和沉降特性不同,因此可被分离出来。如果只是分离细胞中的某种细胞器,可直接根据那种细胞器所对应的相对离心力,在细胞匀浆后进行离心分离。哺乳动物红细胞的结构比较简单,其细胞膜可用低渗离心的方法分离出来。如果是独特的细胞膜,可根据表面电荷的密度采用电泳的方法分离,也可根据大小采用凝胶过滤的方法分离。

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